熒光PCR擴增儀的工作原理和特點
更新時間：2023-07-19 點擊次數(shù)：1430次
熒光PCR擴增儀是一種常用的實驗儀器，用于檢測和分析聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)的過程和結(jié)果。其工作原理基于PCR技術(shù)，但在反應(yīng)過程中引入了熒光探針，使得擴增結(jié)果可以實時監(jiān)測和定量分析。
一、工作原理：
PCR反應(yīng)體系準(zhǔn)備：將待擴增的DNA模板、引物、熒光標(biāo)記的探針等組分加入PCR反應(yīng)管中。
反應(yīng)條件設(shè)定：設(shè)置所需的PCR循環(huán)參數(shù)，如溫度、時間等。
熱循環(huán)：PCR擴增儀通過控制加熱模塊中的溫度，實現(xiàn)PCR循環(huán)的不同階段，包括變性、退火和延伸。 a. 變性：將DNA模板變性為單鏈，通常在高溫下進行。 b. 退火：引物與目標(biāo)DNA序列互補結(jié)合，通常在較低的溫度下進行。 c. 延伸：DNA聚合酶在適當(dāng)溫度下通過引物將DNA模板復(fù)制，合成新的DNA鏈。
熒光信號檢測：儀器配備了熒光探測器，可實時監(jiān)測擴增過程中的熒光信號。 a. 熒光探針：儀器中使用的探針通常是帶有熒光染料和熒光抑制劑的兩個或多個堿基的寡核苷酸序列。在PCR過程中，如果目標(biāo)序列與引物匹配，則熒光探針會被切割，釋放出熒光信號。 b. 熒光信號檢測：擴增過程中，熒光PCR擴增儀實時監(jiān)測熒光信號的強度。強度與目標(biāo)序列的數(shù)量成正比，可以通過熒光信號的變化曲線來定量分析PCR結(jié)果。
二、特點：
實時監(jiān)測：可以實時監(jiān)測PCR過程中的熒光信號變化，提供即時的擴增結(jié)果分析。
定量分析：通過熒光信號的強度，可以對PCR擴增過程中的目標(biāo)序列進行定量分析，如測定起始模板的數(shù)量。
高靈敏度：儀器對熒光信號具有高靈敏度，能夠檢測到微量的目標(biāo)序列。
高特異性：由于采用了引物和熒光探針的設(shè)計，儀器儀對目標(biāo)序列具有高特異性，可以準(zhǔn)確檢測目標(biāo)序列的擴增。
自動化操作：現(xiàn)代的熒光PCR擴增儀通常具有自動化的功能，可以進行多個樣品的批量處理，提高實驗效率。
數(shù)據(jù)分析軟件：儀器通常配備了數(shù)據(jù)分析軟件，可以對擴增結(jié)果進行曲線分析、圖像導(dǎo)出等進一步的數(shù)據(jù)處理。
